耗材專(zhuān)區 | 全自動(dòng)凝膠凈化-高效液相色譜法測定食用油中膽固醇含量

前言

膽固醇是動(dòng)物源性食品中常見(jiàn)的成分，而人類(lèi)過(guò)多食用膽固醇則會(huì )引發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、冠心病等一系列心血管疾病以及風(fēng)濕性關(guān)節炎、癌癥、糖尿病和帕金森等疾病。據文獻報道，食用植物油中一般不含或含有極少量的膽固醇，而動(dòng)植物組織中通常都含有甾醇，動(dòng)物油脂的特征性甾醇是膽固醇。因此，可以通過(guò)檢測食用植物油中的膽固醇含量來(lái)判定植物油中是否含有動(dòng)物油脂，從而推斷植物油中是否混有地溝油。

目前常用的膽固醇樣品提取凈化方法主要是皂化法。而采用凝膠滲透色譜（GPC）進(jìn)行樣品前處理的報道還很罕見(jiàn)。本實(shí)驗采用LabTech AutoClean全自動(dòng)凝膠凈化系統對植物油提取液進(jìn)行凈化，根據分子排阻色譜原理可有效去除植物油中大分子基體干擾物質(zhì)，氮吹濃縮后，采用HPLC進(jìn)行檢測，方法簡(jiǎn)單、快捷，能夠很好地去除干擾物對目標物的影響。

1、實(shí)驗過(guò)程

1.1 儀器與試劑

AutoClean全自動(dòng)凝膠凈化系統，北京萊伯泰科儀器股份有限公司；

S-X3不銹鋼凝膠凈化柱（20*300mm），貨號：Y020207015，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

LC600二元高壓梯度高效液相色譜系統，北京萊伯泰科儀器股份有限公司；

E.T.氮吹濃縮儀，貨號：C020017，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

甲醇（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

乙酸乙酯（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；

環(huán)己烷（色譜純），購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司。

1.2 工作液配制

膽固醇標準使用溶液：10mg/mL，溶劑為乙醇，購自壇墨質(zhì)檢標準物質(zhì)中心；

膽固醇標準工作液：取1.0mL的標準儲備液于10mL的容量瓶中，用乙醇定容，得到濃度為1.0mg/mL的標樣工作液；

分別移取1.0mg/mL的膽固醇標準工作液0.01、0.02、0.05、0.1、0.2mL各置于1.0mL容量瓶中，用乙醇定容至刻度，得到濃度為10、20、50、100、200μg/mL的標準曲線(xiàn)。

1.3 實(shí)驗部分

1.3.1 樣品制備

稱(chēng)取0.5g食用油于50mL離心管中，加入10mL乙酸乙酯-環(huán)己烷（1:1）混合溶液，旋渦震蕩后，將溶液轉移至AutoClean全自動(dòng)凝膠凈化系統的進(jìn)樣瓶中。

1.3.2 凝膠凈化處理

將1.3.1中裝有提取液的進(jìn)樣瓶放置在A(yíng)utoClean全自動(dòng)凝膠凈化系統的平臺上，以等體積的乙酸乙酯和環(huán)己烷混合溶液為流動(dòng)相，流速：5mL/min；紫外檢測波長(cháng)254nm；收集8～16min餾分于60mL收集瓶中，開(kāi)始凝膠凈化，凈化后將60mL收集瓶移至ET濃縮儀中，40℃氮吹至近干，加入1mL乙醇充分溶解，待檢測。

1.3.3 LC分析測定條件

色譜柱：C18，柱長(cháng)250mm，內徑4.6mm，粒徑5μm；

流動(dòng)相：甲醇；

流速：1.0mL/min；

紫外檢測器：檢測波長(cháng)205nm；

柱溫：40℃；

進(jìn)樣量：20μL。

2、       實(shí)驗結果

圖1 膽固醇標準混合溶液的色譜圖

圖2 大豆油加標色譜圖

圖3 玉米胚芽油加標色譜圖

3、       結論

本實(shí)驗使用S-X3不銹鋼凝膠凈化柱（20*300mm）（北京萊伯帕茲檢測科技有限公司，貨號：Y020207015）對植物油中膽固醇提取液進(jìn)行凈化，回收率在88.8%~97.9%之間，RSD為1.5%~3.6%，回收率高、重現性良好，說(shuō)明S-X3不銹鋼凝膠凈化柱（20*300mm）適用于植物油中膽固醇測定的樣品凈化處理，并且結果穩定、可靠。

4、       參考文獻

[1] GB 5009.128-2016 食品安全國家標準 食品中膽固醇的測定 高效液相色譜法

[2] DB34/T 1765-2012 動(dòng)物油脂中膽固醇含量的測定 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法